EVO视讯在总RNA提取中的重要性不容忽视。采用酚-氯仿(CHCl3)抽提法时，如果组织样本保存不当，RNA容易降解。理想的RNA提取应使用新鲜组织或细胞样本，若使用冻存样本，需尽量避免反复冷冻和解冻，这样可以保持RNA的完整性。样本脱离活体或原生生长环境后，内源性RNase的活动会加速RNA的降解，而降解速度受RNase浓度和温度影响。如果是新鲜组织，可以使用RNAKeeper Tissue Stabilizer（Vazyme #R501）进行保存，在室温下能保存一周，而在4℃下可维持一个月，-20℃或-80℃则适合长期储存。

提取RNA时，如果样本投入量过多，可能导致裂解不充分，另外，RNA保存时间过长也会导致降解。因此，建议在提取后尽快对RNA进行纯度和完整性检测，并将其分装于-80℃进行长期储存或-20℃进行短期存放，避免反复冻融对RNA造成的损伤。若提取的RNA中存在基因组污染，记得在加入CHCl3后，在2℃-8℃下高速离心，以有效分离RNA和DNA。

使用柱式提取法时，gDNA-Filter Columns可能会发生堵塞，这是由于样本量过多所引起的。我们的试剂盒适合提取10-20mg的动物组织或2-5×10⁶个细胞。超量样本不仅降低产量，还会影响RNA的纯度。特别是在含有肌纤维较多的样本（如肌肉、心脏、皮肤）中，建议使用液氮研磨以减少堵塞现象。若研磨或匀浆不充分，可能导致碎片堵塞柱子，建议在加入gDNA Filter Columns前进行离心以去除大颗粒。

RNA的提取量低或无法提取可能与样本保存不当及处理不当有关。收集样本后应立即进行后续实验，或将其迅速冷冻于-70℃或液氮中。若匀浆或液氮研磨未充分，也会影响RNA的释放。洗脱过程应使用无RNase的水，且洗脱体积应为50-200μl。若洗脱效果不理想，可以在温度条件下多次洗脱以提高纯度。

RNA降解通常与样本质量、RNase污染及操作方式相关。若样本未及时保存，其RNA将被降解，因此必须迅速处理。为避免冻融引起的降解，建议将组织样本分批冻存。在电泳过程中，确保设备和试剂均无RNase污染，以减少RNA降解现象的发生。使用EVO视讯的产品可有效降低污染风险。

在进行下游实验时，如果实验结果不理想，可能是因为洗脱后RNA中仍有盐分或乙醇残留。应使用Buffer RW2进行两次洗涤，并根据情况调整室温放置时间以去除残留。在PCR扩增中，确保样本的稀释程度合适，观察CT值是否在18-28的范围内，以获取准确的结果。

针对荧光定量PCR的各种问题，包括CT值偏高、引物设计不良及反应体系污染，EVO视讯提供了针对性的解决方案，确保科研工作的顺利进行。我们的团队始终致力于为生物医药领域的研究者提供最专业的产品和技术服务，助力他们在基因治疗和细胞治疗等领域的推进。

中科腾宇(广州)科技技术有限公司以其卓越的技术力量和丰富的行业资源，向生物领域的科研人员推荐EVO视讯的高科技产品，期待与您携手共创美好未来。